【资料图】
强氧化剂(过亚硝酸根是强氧化剂!)
2.9.3乳蛋白氧化产生的自由基
梅森实验室开发了ESR-HPLC技术来检测蛋白质氧化产生的自由基[74]。DMPO的多克隆抗血清可以特异性和敏感性地鉴定蛋白质和DMPO产生的加合物的性质,他们研究了乳过氧化物酶(LPO)产生的自由基(图16)。
在DMPO存在下,LPO与GSH反应生成LPO自由基DMPO加合物,与GSH、LPO、DMPO、pH值有关,GSH不能被H2O2取代。加入叠氮化钠、过氧化氢酶、维生素C、硫氰酸、I-和亚硝酸盐,多酚加合物明显减少。
在LPO/GSH/DMPO体系中,ESR自旋捕捉到了一个GSH自由基信号,但没有直接检测到蛋白质自由基信号。添加叠氮化钠、过氧化氢酶、维生素C、I-和硫氰酸盐显著降低了这种信号,而多酚和亚硝酸盐则增强了这种信号。
GSH能明显改变LPO化合物II的光谱特征,说明GSH与化合物II的血红素结合,而多酚和亚硝酸盐能抑制这种变化,使化合物II还原为天然酶,GSH还能抑制LPO的氧化活性。因此,这些结果表明该自由基可能被DMPO通过巯基与化合物IId血红素反应形成的血红素中心自由基捕获。
2.9.4糖胺聚糖氧化产生的自由基
过氧亚硝基/过氧亚硝基(ONOO/ONOOH)是一种强氧化剂,可在炎症过程中大量产生,通过氧化损伤细胞成分。Davies等人研究了ONOO/ONOOH和糖胺聚糖产生的产物。ONOO/ONOOH可以修饰透明质酸、肝素、软骨素、皮肤素和硫酸肝素,但它们都依赖于氧。